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本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷。
人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒使用說明書
【 試劑盒名稱】
人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒
【試劑盒用途】
定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗BB抗體(BB-Ab)的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預(yù)先包被抗BB抗體(BB-Ab)透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中抗BB抗體(BB-Ab)濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中抗BB抗體(BB-Ab)含量。
【試劑盒組成】
1酶標包被板12孔×8條7底物夜A6mL
2標準品：200ng/ml0.6mL8底物夜B6mL
320倍濃縮洗滌液20mL9終止液6mL
4標準品稀釋液6mL10說明書1份
5樣本稀釋液6mL11封板膜1張
6酶標試劑6mL12密封袋1個
備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml
【人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
標準規(guī)格酶標儀
精密移液器及一次性吸頭
蒸餾水
一次性試管
吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒使用說明書
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
【人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA試劑盒注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(0.1-200ng/ml范圍內(nèi))，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
【操作程序總結(jié)】
準備試劑，樣品和標準品 加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
【檢測范圍】
0.1-200ng/ml
【規(guī)格】
96T/盒、48T/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個月
【供應(yīng)商】
天津本生
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